Arg34-GLP-1(9-37)的制备、选择性保护及偶联反应过程

1）通过大肠杆菌发酵制备得到Arg34-胰高血糖素样肽-1(9-37)，纯度超过95%。

2）该多肽（Ⅰ）与二叔丁基二碳酸酯反应生成保护产物（Ⅱ），纯度为88%。

3）产物Ⅱ纯度较低的原因之一是多肽N端氨基也可参与反应，产生副产物。

4）HPLC图谱中产物Ⅰ后出现一个含量5%的色谱峰，经LC-MS分析确认为双修饰副产物。

5）产物Ⅱ与活化的Boc-His(Boc)-Aib-OBt反应1小时后，原料峰完全消失，反应完全。

6）偶联反应生成的产物（Ⅲ）纯度为76%。

1）产物Ⅲ在三氟乙酸中快速脱除Boc保护基，得到终产物Ⅳ（Aib8-Arg34-胰高血糖素样肽-1(7–37)），纯度为75%。

2）经LC-MS分析，终产物Ⅳ的相对分子质量与理论值一致。

3）产物Ⅲ在质谱分析中的实测质荷比比理论值低100道尔顿。

4）对原料Boc-His(Boc)-Aib进行同样条件下的质谱分析，其实测质荷比同样比理论值低100道尔顿。

5）该现象的原因是组氨酸咪唑基上的保护基在质谱分析条件下易脱除。

合成路线总结与终产物表征

1）本研究通过液相片段缩合法成功合成了目标产物Aib8-Arg34-胰高血糖素样肽-1(7–37)。

2）从0.3085克产物Ⅰ反应得到0.3102克产物Ⅱ，收率为理论值的97%。

3）产物Ⅱ与活化的Boc-His(Boc)-Aib-OBt反应后，得到0.3280克产物Ⅲ，收率为理论值的91%。

4）终产物Ⅳ经一步反相纯化（流动相含0.1%三氟乙酸的水/乙腈体系），得到0.1992克纯度超过98%的目标多肽，产率约为60%。

5）对终产物Ⅳ进行肽图分析，结果证实了组氨酸-2-氨基异丁酸成功偶联至多肽的N端。