工艺优化过程解析：LPPS的定制化解决方案 研究团队转向LPPS，并针对性地开发了一系列关键技术。

1. 关键反应效率与选择性提升

·空间位阻偶联：对于Fragment B合成中极度拥挤的α,α-二烷基氨基酸偶联步骤，团队创新性地采用三氟乙酰基（Tfa）保护的氨基酸。Tfa基团能显著增强羰基的亲电性，从而在LPPS条件下（T3P/DMAP）高效完成偶联，避免了SPPS中所需的大量氨基酸过量（从4.5当量降至2.0当量）。 

·温和脱保护：常规的叔丁基（t-Bu）脱保护使用三氟乙酸（TFA），但会导致肽链断裂。 

团队开发了三甲基硅基三氟甲磺酸酯（TMSOTf）/六甲基二硅氮烷（HMDS） 的温和条件（Table 1），成功实现了t-Bu的专一性脱除，将肽键断裂杂质从33.3%降至0.4%。

·抑制DKP形成：

针对Fragment A中 Ile-MeAla-Aze序列极易形成DKP的难题，团队采用了“同步脱保护-偶联”策略。  在钯碳催化氢解脱除Cbz保护基的同时，加入下一个Teoc保护氨基酸的五氟苯酯（OPfp）进行原位偶联，使新生的氨基被立即酰化，从而将DKP相关的缺失序列杂质从17%成功抑制至未检出水平。 

2. 贯穿始终的杂质控制策略

·活性酯淬灭：为确保每步偶联后杂质能被液-液萃取有效去除，必须彻底水解过量的活性酯。研究发现，在碱性水相中加入N-甲基咪唑（NMI）或4-二甲氨基吡啶（DMAP） 等亲核胺，可通过形成酰铵中间体大幅加速活性酯的水解，解决了其去除不完全的核心问题。

·环化位点与条件优化：为最大化主环产物、最小化寡聚副产物，团队通过评估选择了位点1（6-7位）进行大环化。  进一步地，采用反向加料策略（将线性肽溶液滴加到HATU溶液中）并优化溶剂比例，在将总溶剂体积从200 v/w大幅降至50 v/w的同时，将目标环肽与环二聚体的比例从83:14提升至97:3，显著提高了生产效率和选择性。 

·结晶驱动最终纯化：得益于LUNA18独特的结晶性，团队开发了以丙酮/水为溶剂体系的直接结晶工艺，成功将粗品纯度从82.2%提升至98.5%以上，完全避免了色谱纯化，适合大规模生产。